血液细胞分子生物学实验室 |
编号:TCM-2009-171 负责人:高瑞兰 |
依托单位:浙江省中医院 研究方向:分子生物学 所在省:浙江 市: |
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简介: 血液病研究所建于1984年,2001年成为浙江省中西医结合血液病研究所,2003年成为国家中医药管理局三级实验室,所在医院为国家中医药临床研究基地(研究型中医院,主攻血液病),重点研究病种为再生障碍性贫血和白血病。2009年成为国家中医药管理局“中医血液病学”重点学科,及“再生障碍性贫血益气养血”重点研究室。“十一五”重点专科全国“髓劳病”(再生障碍性贫血)协作组组长单位,主持实施浙江省中医药重大疾病创新平台项目“再生障碍性贫血中医药干预方案及疗效评价相关机制研究”。任中国中西医结合学会血液学专业副主任,并成立浙江省中西医结合学会血液学专业委员会,任主任委员。 现有专职研究人员9名,包括实验血液学研究人员、中药提取和分析研究人员等,具备血液病相关动物模型、细胞学和分子生物学实验,及中药提取分离和分析等相关中药新药开发临床前研究的技术力量。实验面积720平方,配套的仪器设备510余万元,包括激光共聚焦显微镜、流式细胞仪,及大孔树脂分离的中试设备和高效液相色谱仪等,近年受各级政府资助的实验室建设经费310余万元。 主要研究方向:中药有效成分治疗难治性血液病,研究和开发安全有效治疗血液病的中药5类新药,从提取分离中药成分→生物学活性筛选→对血液病动物模型的疗效→干/祖细胞增殖分化、凋亡→信号传导、基因转录调控、DNA甲基化等→中药有效成分的定性定量分析→新药开发的临床前研究等。建立和引进血液病动物模型、细胞与分子实验相结合的多种先进技术平台,用于相关中药新药的研究和开发。2008年完成派能达胶囊治疗血细胞减少症中药5类新药的临床前研究,2010年3月获国家药监局新药证书(临床研究批件)2项,①派能达胶囊:批准号2010L00856,②人参二醇组皂苷提取物:批准号2010L00857。 先后获浙江省政府科学技术奖10项,《三七皂苷诱导造血干/祖细胞增殖分化及信号传递途径》2005年浙江省政府科技一等奖,在我省中医药领域首次获得省政府一等奖;《半相合骨髓移植联合中医药治疗恶性血液病》2006年浙江省科技二等奖;《人参皂苷治疗难治性血液病及对基因转录调控》2001年浙江省科技二等奖等。近年承担课题28项,受资助550余万元。其中国际合作2项、“十一五”支撑和重大新药创制专项2项、国家自然科学基金3项等。与澳大利亚名校新南威尔士大学友好合作历时16年,共同承担的国际合作项目,分别受两国政府资助,研究工作在两国实验室同时进行。2009年应邀在新南威尔士大学报告有关派能达新药的研究和开发,引起很大反响和高度赞扬,澳方要求进一步合作有关抗白血病中药新药的研究和开发,已发展为“十一五”重大新药创制专项。被表彰为省高校优秀留学回国人员,全国卫生外事工作先进者。曾先后与国内多家先进的实验室合作,复旦大学、浙江大学、中科院上海药物所、中国军事医学科学院、医科院血研所、沈阳药科大学、北京西苑医院、杭州中药创新药物研究所、浙江省药检所、浙江省中医药研究院等。 | |
主要实验技术: 1.制备血液病相关动物模型观察中药的疗效 包括免疫介导型再生障碍性贫血小鼠模型、白消安所致再生障碍性贫血小鼠模型、免疫性血小板减少症小鼠、大鼠模型(自行制备抗血小板抗体)、放疗或化疗所致的骨髓抑制血细胞减少小鼠模型、荷白血病皮下瘤裸鼠模型及白血病细胞浸润模型等。用于观察相关中药的疗效,包括血象、骨髓象、T细胞亚群分析、组织病理切片、免疫细胞化学,及造血祖细胞培养等指标。 2.造血干/祖细胞培养观察促进增殖和诱导分化的研究 用于筛选对造血有效的中药及其成分,以及了解血液病患者的造血功能障碍和造血干/祖细胞的缺陷。CD34+造血干/祖细胞的分离纯化和培养、体外半固体集落培养骨髓多向造血祖细胞(CFU-GEMM)、早期和晚期的红系造血祖细胞(BFU-E,CFU-E)、粒单系造血祖细胞(CFU-GM)和巨核系造血祖细胞(CFU-MK)。中药有效成分诱导造血细胞分化的研究,经恰当剂量的药物诱导细胞分化,采用流式细胞术、免疫细胞化学和激光共聚焦显微术检测细胞表面分化标记,及分化相关蛋白表达的变化。 3.抑制白血病细胞增殖、促进分化、诱导凋亡及增强化疗药敏的研究 用于筛选和研究抗白血病有效的中药及其成分。白血病细胞增殖抑制试验采用液体培养MTT检测方法、半固体集落生成试验、细胞周期检测等。诱导分化研究采用药物处理的细胞,经流式细胞术、免疫细胞化学和激光共聚焦显微术检测细胞表面分化标记,及分化相关蛋白表达的变化。诱导凋亡采用观察凋亡小体、Annexin-V检测、细胞增殖周期和DNA含量分析、琼脂糖凝胶电泳DNA梯形条带,及凋亡相关酶和基因检测。 4.细胞内信号传递途径的研究 用于中药有效成分作用和机制的研究。Western免疫印迹法、ELASA免疫测定方法、电泳带移动阻滞试验(EMSA)、抗体胶移动试验(Supershift)、免疫沉淀法、RT-PCR、及重组载体构建和分子克隆和表达等。 5.其它相关实验技术 树突状细胞的培养及对抗原提呈细胞成熟、表型和功能的调节;激光共聚焦显微技术观察细胞荧光染色蛋白、基因定位和显微成像;骨髓间充质干细胞培养及中药的干预作用;微小RNA与白血病细胞增殖分化的研究。 对外服务 1.多种细胞生物学实验技术 免疫磁珠分离和纯化造血干/祖细胞如CD34+细胞,及其它多种相应的靶细胞等;半固体培养造血干/祖细胞集落形成试验;细胞增殖周期和DNA含量分析等;间充质干细胞培养和传代,及中药的干预和治疗作用;抑制白血病细胞增殖、促进分化、诱导凋亡及增强化疗药敏的技术等。树突状细胞的培养及对抗原提呈细胞成熟、表型和功能的调节;激光共聚焦显微技术观察细胞荧光染色蛋白、基因定位和显微成像;骨髓间充质干细胞培养及中药的干预作用。 2.多种分子生物学实验技术 Western免疫印迹法、ELASA免疫测定方法、电泳带移动阻滞试验(EMSA)、抗体胶移动试验(Supershift)、免疫沉淀法、RT-PCR、重组载体构建和分子克隆和表达,及微小RNA转染入细胞和检测相关基因和蛋白的表达等。 优势特色技术 建立和引进上述血液病动物模型、细胞学与分子实验相结合的多种先进技术平台,用于中药及其成分的生物学活性(与疗效密切相关)研究,并将活性作为指标,指导和优化中药提取分离的制备工艺,成功地用于中药5类新药派能达治疗血细胞减少症的临床前研究,2010年3月获国家药监局新药临床研究批件2项。证明上述先进技术能够筛选出具有生物效应的中药成分、中药有效成分的制备工艺、检测药物的生物学活性,及测定患者对药物的敏感性等。开发安全有效治疗血液病的中药5类新药,研究流程从提取分离中药成分→生物学活性筛选→对血液病动物模型的疗效→干/祖细胞增殖分化、凋亡→信号传导、基因转录调控、DNA甲基化等→中药有效成分的定性定量分析→新药开发的临床前研究等。 | |